Đánh giá sự gắn kết của [14C]Oritavancin vào đĩa Microtiter Flashplate bằng phương pháp đo gần độ phát quang

Nghiên cứu này khảo sát khả năng gắn kết của [14C]oritavancin và [14C]ciprofloxacin với bề mặt đĩa Microtiter Flashplate bằng cách sử dụng phương pháp đo gần độ phát quang trong pha rắn. Nghiên cứu tập trung vào việc định lượng khả năng gắn kết của các hợp chất phóng xạ với bề mặt đĩa mà không cần thêm cocktail đo quang phát quang. Kết quả cho thấy sự khác biệt rõ rệt trong hành vi gắn kết giữa hai hợp chất, với [14C]oritavancin cho thấy sự gắn kết đáng kể và phụ thuộc vào nồng độ, trái ngược với [14C]ciprofloxacin, chỉ cho thấy sự gắn kết tối thiểu dưới điều kiện tương tự.

Phương pháp đo gần độ phát quang (SPA) là một công cụ quan trọng trong khám phá thuốc và nghiên cứu tương tác phân tử, cho phép phát hiện các phân tử phóng xạ ở gần một bề mặt nhúng chất phát quang. Nghiên cứu này sử dụng SPA để so sánh sự gắn kết của [14C]oritavancin và [14C]ciprofloxacin với các đĩa Microtiter Flashplate, một loại đĩa có bề mặt phủ chất phát quang thuận lợi cho các phép đo này.

Vật liệu và Phương pháp

Vật liệu: [14C]oritavancin, [14C]ciprofloxacin, đĩa Microtiter Flashplate.

Thủ tục: Các mẫu của [14C]oritavancin và [14C]ciprofloxacin với nồng độ 16 μg/ml được áp dụng vào các giếng của một Flashplate. Sự gắn kết được đánh giá cả trước và sau một loạt các bước rửa bằng cách đo số lượng phát quang (đơn vị là số lần đếm mỗi phút, cpm).

Thu thập Dữ liệu: Số lượng phát quang được đo bằng một thiết bị đếm phù hợp cho việc phát hiện các hạt β phát ra từ nhãn [14C], không cần thêm cocktail đo quang phát quang.

Kết quả

Phân tích gắn kết cho thấy:

[14C]oritavancin thể hiện sự gắn kết cao với bề mặt Flashplate, với số lượng phát quang đạt đến 2,847 ± 258 cpm với nồng độ 16 μg/ml.

Ngay cả sau các bước rửa, 64% tín hiệu phát quang gần ban đầu từ [14C]oritavancin được giữ lại, cho thấy sự gắn kết mạnh mẽ và ổn định với bề mặt đĩa.

Ngược lại, [14C]ciprofloxacin chỉ thể hiện sự gắn kết tối thiểu, với số đếm trước khi rửa không vượt quá 245 ± 12 cpm và giảm xuống mức nền sau khi rửa.

Bàn luận

Sự khác biệt về gắn kết được quan sát giữa [14C]oritavancin và [14C]ciprofloxacin có thể được giải thích bởi các tính chất hóa học khác nhau của hai loại thuốc, có thể ảnh hưởng đến sự tương tác của chúng với chất liệu phát quang trên Flashplate. Độ thân dầu cao hơn và có thể là cấu trúc phân tử lớn hơn của [14C]oritavancin có thể tạo điều kiện tương tác và gắn kết tốt hơn với các miền thân nước trên bề mặt đĩa.

Kết luận

Nghiên cứu hiệu quả chứng minh tính ứng dụng của SPA trong việc đánh giá tính chất gắn kết bề mặt của thuốc, được làm nổi bật bởi sự gắn kết đáng kể của [14C]oritavancin so với [14C]ciprofloxacin. Phép thử này cung cấp một phương pháp mạnh mẽ để đánh giá tương tác thuốc trong môi trường không nhãn, điều này rất quan trọng cho sự phát triển của hệ thống đưa thuốc và hiểu biết về tương tác thuốc-thụ thể ở cấp độ phân tử.