Oritavancin, một loại kháng sinh glycopeptide bán tổng hợp, đã chứng minh hoạt động phổ rộng chống lại vi khuẩn Gram dương, bao gồm cả các chủng kháng các loại kháng sinh khác. Hiểu rõ các đặc tính gắn kết của oritavancin là rất quan trọng để đánh giá dược động học của nó, đặc biệt là tương tác của nó với các bề mặt trong hệ thống phân phối thuốc. Bài viết này chi tiết một nghiên cứu về đánh giá trực tiếp sự gắn kết của oritavancin lên bề mặt đĩa vi thể, sử dụng một phương pháp đánh giá sự gắn kết chất phóng xạ pha rắn, tập trung vào kỹ thuật tiếp cận gần với hiện tượng phát xạ.
Vật liệu và Phương pháp
1. Gắn nhãn Phóng xạ cho Oritavancin và Ciprofloxacin
Trong nghiên cứu này, [14C]oritavancin và [14C]ciprofloxacin được sử dụng để theo dõi các đặc tính gắn kết của kháng sinh lên các bề mặt đĩa vi thể. Hoạt độ riêng của các loại thuốc được gắn nhãn phóng xạ này đã được điều chỉnh với thuốc không gắn nhãn để chuẩn hóa số lượng đếm đầu vào. Việc chuẩn hóa này là cần thiết để đảm bảo mỗi nồng độ thuốc có số đếm tương đương trong quá trình phát xạ, cho phép so sánh trực tiếp giữa oritavancin và ciprofloxacin.
2. Chuẩn bị Dung dịch Thuốc
Các loại thuốc được gắn nhãn phóng xạ được pha loãng trong nước canh Muller-Hinton bổ sung cation (CAMHB) với dải nồng độ từ 2 đến 16 µg/ml. Mỗi dung dịch được lấy 100 µl và được đưa vào các giếng của đĩa vi thể Flashplate (mã sản phẩm SMP200; Perkin-Elmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA). Đĩa vi thể Flashplate, chứa chất phát xạ trên bề mặt, được sử dụng để phát hiện sự tiếp cận của thuốc gắn nhãn phóng xạ thông qua phát xạ mà không cần thêm chất phát xạ lỏng.
3. Ủ và Đếm Phát xạ
Đĩa vi thể được ủ trong 16 giờ ở nhiệt độ môi trường, các giếng được đậy nắp để ngăn chặn bay hơi và nhiễm bẩn. Sau khi ủ, số lượng đếm phát xạ mỗi giếng được đo bằng máy đếm phát xạ MicroBeta TriLux. Máy đếm phát xạ MicroBeta TriLux có khả năng phát hiện sự tiếp cận của thuốc gắn nhãn phóng xạ với chất phát xạ trên đĩa, cung cấp đánh giá định lượng về sự gắn kết của thuốc lên bề mặt đĩa.
4. Rửa và Đo Tín hiệu Còn lại
Sau khi đếm phát xạ, các giếng được rửa bốn lần với 300 µl CAMHB để loại bỏ các phân tử thuốc không gắn kết hoặc gắn kết lỏng lẻo. Bước rửa này rất quan trọng để phân biệt giữa các loại thuốc thực sự gắn kết với bề mặt và những loại thuốc chỉ đơn giản là kết tủa. Sau khi rửa, tín hiệu phát xạ gần còn lại được đo lại để đánh giá mức độ gắn kết của thuốc với bề mặt giếng.
Kết quả
1. Số lượng Đếm Phát xạ Ban đầu
Số lượng đếm phát xạ ban đầu cho thấy cả [14C]oritavancin và [14C]ciprofloxacin đều có tín hiệu tiếp cận đáng kể, cho thấy một sự gắn kết ban đầu lên bề mặt đĩa vi thể. Tuy nhiên, cường độ của các tín hiệu thay đổi tùy thuộc vào loại thuốc và nồng độ.
2. Tín hiệu Còn lại Sau khi Rửa
Sau khi rửa, các tín hiệu phát xạ gần còn lại cung cấp cái nhìn sâu sắc về bản chất của số đếm ban đầu. Nếu các đếm số là do sự gắn kết lên bề mặt, tín hiệu còn lại đáng kể sẽ được mong đợi sau khi rửa. Ngược lại, một sự giảm đáng kể trong tín hiệu sẽ chỉ ra rằng các đếm số ban đầu là do sự kết tủa của thuốc chứ không phải là gắn kết.
Đối với oritavancin, các tín hiệu còn lại vẫn ở mức cao trong dải nồng độ, cho thấy sự gắn kết mạnh mẽ và có thể không thể đảo ngược lên bề mặt đĩa vi thể. Trong khi đó, ciprofloxacin cho thấy sự giảm đáng kể trong tín hiệu sau khi rửa, chỉ ra rằng một phần của tín hiệu ban đầu có khả năng là do kết tủa thay vì gắn kết lên bề mặt.
Thảo luận
Đánh giá trực tiếp sự gắn kết của [14C]oritavancin lên bề mặt đĩa vi thể bằng phương pháp đánh giá sự gắn kết chất phóng xạ pha rắn đã tiết lộ những thông tin quan trọng về đặc tính gắn kết của thuốc. Các tín hiệu còn lại đáng kể sau khi rửa cho thấy oritavancin có ái lực cao với bề mặt đĩa vi thể, có thể chỉ ra sự tương tác mạnh mẽ với vật liệu hoặc sự gắn kết không thể đảo ngược.
Sự gắn kết mạnh mẽ này có thể ảnh hưởng đến sự phân phối và hiệu quả của thuốc trong các môi trường lâm sàng, nơi tương tác với các bề mặt khác nhau có thể ảnh hưởng đến dược động học và phân phối của thuốc. Phương pháp được sử dụng trong nghiên cứu này, đặc biệt là phương pháp tiếp cận gần với hiện tượng phát xạ trên đĩa vi thể Flashplate, đã chứng minh là một công cụ hiệu quả để đánh giá trực tiếp sự tương tác giữa thuốc và bề mặt.
Kết luận
Nghiên cứu đã thành công trong việc chứng minh các đặc tính gắn kết của oritavancin lên bề mặt đĩa vi thể bằng phương pháp đánh giá sự gắn kết chất phóng xạ pha rắn. Kết quả nhấn mạnh ái lực gắn kết mạnh mẽ của oritavancin so với ciprofloxacin, cung cấp thông tin quý giá cho các nghiên cứu dược động học và phân phối thuốc trong tương lai. Phương pháp này có thể được áp dụng cho các loại thuốc khác để hiểu rõ hơn về sự tương tác của chúng với bề mặt và tối ưu hóa các ứng dụng lâm sàng của chúng.
Tài liệu Tham khảo
Flashplate Microtiter Plate, Mã sản phẩm SMP200, Perkin-Elmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA.
MicroBeta TriLux Scintillation Counter, Perkin-Elmer Life and Analytical Sciences, Waltham, MA.
Bài viết này cung cấp một cái nhìn toàn diện về đánh giá trực tiếp sự gắn kết của oritavancin lên bề mặt đĩa vi thể, sử dụng phương pháp đánh giá sự gắn kết chất phóng xạ pha rắn. Nó nhấn mạnh tầm quan trọng của việc hiểu rõ sự tương tác giữa thuốc và bề mặt trong bối cảnh dược động học và phân phối thuốc.